Verificación del desempeño general del método Elecsys® Chagas en la detección de anticuerpos específicos contra Trypanosoma cruzi / Verification of the general performance of the Elecsys® Chagas method in the detection of specific antibodies against Trypanosoma cruzi

Resumen La enfermedad de Chagas es una parasitosis producida por Trypanosoma cruzi, prevalente principalmente en el continente americano, y observada en regiones no endémicas, producto de viajes y migraciones. El objetivo de este estudio fue comparar el desempeño del ensayo Elecsys® Chagas (Roche Diagnostics Alemania) (ECLIA) para el diagnóstico de la infección chagásica crónica con el método estándar y evaluar su posible empleo en reemplazo del método automatizado existente. Se estudiaron 77 muestras de sueros pertenecientes a pacientes con diagnóstico presuntivo de enfermedad de Chagas, procesadas por los distintos métodos disponibles en la Sección Parasitología del Hospital Muñiz: inmunoensayo quimioluminiscente de micropartículas (CMIA) (Abbott), enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA) (Wiener) y hemaglutinación indirecta (HAI) (Lab. Lemos S.R.L.). Los resultados de los métodos ELISA y HAI fueron comparados con los obtenidos en la prueba ECLIA, y estos a su vez con el método automatizado disponible. De las muestras analizadas, 22 (28,57%) presentaron IgG anti-T. cruzi y 55 (71,43%) resultaron negativas. Con el método ECLIA se logró un 100% en los parámetros de desempeño, con diferencias en los intervalos de confianza. La razón de verosimilitud positiva y la razón de verosimilitud negativa clasificaron al ensayo como excelente y la potencia global del test apoyó esa afirmación. Los métodos inmunológicos automatizados ayudan a la performance diagnóstica en la etapa crónica de la enfermedad de Chagas, permiten minimizar errores, favorecen la velocidad de emisión de los resultados y, debido a su alta sensibilidad y especificidad, en ciertos escenarios podrían proponerse para usar como única técnica.

Abstract Chagas disease is a parasitosis caused by Trypanosoma cruzi, prevalent mainly in the American continent, and observed in non-endemic regions as a result of travel and migration. The objective of this study was to compare the performance of the Elecsys® Chagas (Roche Diagnostics Alemania) (ECLIA) assay for the diagnosis of chronic Chagas infection with the diagnostic standard, and to evaluate its possible use as a replacement for the existing automated method. A total of 77 serum samples belonging to patients with a presumptive diagnosis of Chagas disease were evaluated, processed by the different methods available in the Parasitology Section of Hospital Muñiz: microparticle chemiluminescent immunoassay (CMIA) (Abbott), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (Wiener) and indirect hemagglutination (HAI) (Lab. Lemos S.R.L). The results of the ELISA and HAI methods were compared with those obtained in the ECLIA test, and these in turn with the available automated method. Of the samples analysed, 22 (28.57%) presented IgG anti-T. cruzi and 55 (71.43%) were negative. With the ECLIA method, 100% was achieved in the performance parameters, with differences in the confidence intervals. The positive likelihood ratio and the negative likelihood ratio classify the essay as excellent, and the overall power of the test supports this statement. Automated immunological methods help diagnostic performance in the chronic stage of Chagas disease, allow minimising errors, favour the speed of issuance of results, and due to the high sensitivity and specificity, in certain scenarios, they could be proposed for use as single technique.

Resumo A doença de Chagas é uma parasitose causada pelo Trypanosoma cruzi, prevalente principalmente no continente americano, e observada em regiões não endêmicas em decorrência de viagens e migrações. O objetivo deste estudo foi comparar o desempenho do ensaio Elecsys® Chagas (Roche Diagnostics Alemanha) (ECLIA) para o diagnóstico da infecção crônica de Chagas com o método padrão e avaliar seu possível uso em substituição do método automatizado existente. Foram avaliadas 77 amostras de soro pertencentes a pacientes com diagnóstico presuntivo de doença de Chagas, processadas pelos diferentes métodos disponíveis na Seção de Parasitologia do Hospital Muñiz: imunoensaio quimioluminescente de micropartículas (CMIA) (Abbott), ensaio imunoenzimático de adsorção (ELISA) (Wiener) e hemaglutinação indireta (HAI) (Lab. Lemos S.R.L). Os resultados dos métodos ELISA e HAI foram comparados com os obtidos no teste ECLIA, e estes por sua vez com o método automatizado disponível. Das amostras analisadas, 22 (28,57%) apresentaram IgG anti-T. cruzi e 55 (71,43%) foram negativos. Com o método ECLIA, foram obtidos 100% nos parâmetros de desempenho, com diferenças nos intervalos de confiança. A razão de verossimilhança positiva e a razão de verossimilhança negativa classificam o ensaio como excelente, e a potencia geral do teste conformou essa afirmação. Os métodos imunológicos automatizados auxiliam no desempenho diagnóstico na fase crônica da doença de Chagas, permitem minimizar erros, favorecem a rapidez na emissão dos resultados e, devido à alta sensibilidade e especificidade, em determinados cenários, poderiam ser propostos para uso como técnica única.

Evaluación del desempeño de una prueba rápida para el tamizaje de la infección por Trypanosoma cruzi en pacientes con el virus de la inmunodeficiencia humana / Performance evaluation of a rapid test for the screening of Trypanosoma cruzi infection in patients with human immunodeficiency virus

Resumen Un diagnóstico rápido y seguro de la infección por Trypanosoma cruzi permite la administración inmediata de un tratamiento etiológico específico, en los casos clínicamente manifiestos. En el presente trabajo, en 100 sueros de pacientes con diagnóstico presuntivo de infección por T. cruzi, se evaluó el desempeño de la prueba rápida Chagas Ab Rapid SD Bioline (PDR) para el diagnóstico serológico, se la comparó con el estándar diagnóstico (par serológico) y se la valoró para su empleo en la rutina del laboratorio. La PDR reveló un índice de concordancia muy bueno respecto del estándar diagnóstico (Kappa=0,989 [IC95% 0,965-1,000]) y los parámetros de sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos revelaron un buen desempeño. El índice de Youden informó un buen rendimiento de la prueba (J=0,98 [IC95% 0,93-1,02]); y en el mismo sentido, tanto la razón de verosimilitud positiva (RV (+)= infinito), como la negativa (RV (-)= 0,02 [IC95% 0,00-0,16]), mostraron aumentada la probabilidad que la enfermedad blanco esté presente o ausente, cuando la técnica así lo determinaba. El empleo de una PDR, por su simpleza y buen desempeño (con resultados disponibles el mismo día) produciría una optimización de recursos, podría realizarse en lugares donde el acceso al diagnóstico es limitado y donde su incorporación no requeriría de una infraestructura importante. Por otro lado, en nuestro caso, podría ser utilizada como segunda prueba, para incrementar la especificidad del diagnóstico serológico de la infección por T. cruzi.

Abstract A quick and safe diagnosis of Trypanosoma cruzi infection allows the immediate etiological treatment in clinically manifested cases. In the present work, the performance of the rapid Chagas Ab Rapid SD Bioline (PDR) test for serological diagnosis was evaluated in 100 sera from patients with a presumptive diagnosis of T. cruzi infection, it was compared with the diagnostic standard (serological pair) and this technique was valued to be used within the laboratory routine. The PDR revealed a very good concordance index with respect to the diagnostic standard (Kappa=0.989 [95% CI 0.965-1.000]) and the parameters of sensitivity, specificity, positive and negative predictive values revealed good performance. The Youden index reported good performance of the diagnostic test (J = 0.98 [95% CI 0.93-1.02]); and in the same sense, both the positive likelihood ratio (RV (+) = infinity), and the negative (RV (-) = 0.02 [95% CI 0.00-0.16]) showed an increased probability whether the target disease was present or absent, when the technique so determined. The use of a PDR, due to its simplicity and good performance (with results available on the same day) would produce an optimization of resources, could be carried out in places where access to the diagnosis is limited and where its incorporation would not require an important infrastructure. On the other hand, in our case, it could be used as a second test, to increase the specificity of the serological diagnosis of T. cruzi infection.

Resumo Um diagnóstico rápido e seguro da infecção pelo Trypanosoma cruzi permite a administração imediata de um tratamento etiológico específico nos casos clinicamente manifestos. No presente trabalho, o desempenho do teste rápido Chagas Ab Rapid SD Bioline (PDR) para o diagnóstico sorológico foi avaliado em 100 soros de pacientes com diagnóstico provável de infecção por T. cruzi, foi comparado com o padrão diagnóstico (par sorológico) e essa técnica foi avaliada para ser utilizada na rotina do laboratório. O PDR revelou um índice de concordância muito bom em relação ao padrão diagnóstico (Kappa=0,989 [IC 95% 0,965-1.000]) e os parâmetros de sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos revelaram bom desempenho. O índice de Youden informou um bom desempenho do teste diagnóstico (J = 0,98 [IC 95% 0,93-1,02]); e, no mesmo sentido, tanto a razão de verossimilhança positiva (RV (+) = infinito), quanto a negativa (RV (-) = 0,02 [IC 95% 0,00-0,16]), mostraram uma probabilidade aumentada de a doença-alvo estar presente ou ausente, quando a técnica assim o determinar. A utilização de um PDR, pela sua simplicidade e por um bom desempenho (com resultados disponíveis no mesmo dia) produziria uma otimização de recursos, podendo ser realizado em locais onde o acesso ao diagnóstico é limitado, e onde a sua incorporação não exigiria um infraestrutura importante. Por outro lado, no nosso caso, poderia ser utilizado como segundo teste, para aumentar a especificidade do diagnóstico sorológico da infecção pelo T. cruzi.

Evaluación de la prueba rápida VIRAPID® Hidatidosis / Evaluation of the VIRAPID® Hydatidosis rapid test / Avaliação do teste rápido VIRAPID® Hidatidose

El diagnóstico presuntivo de la equinococosis quística (EQ) se basa en estudios clínicos e imagenológicos, en particular aquellos que aplican ultrasonido, en datos epidemiológicos, y se confirma con la serología específica. En las zonas endémicas rurales, donde los procedimientos imagenológicos no siempre se encuentran disponibles, al igual que la serología convencional debido a la falta de laboratorios suficientemente equipados, las pruebas de diagnóstico rápido (TDRs) pueden ser una herramienta de gran utilidad. Se evaluó aquí la precisión diagnóstica de VIRAPID® Hidatidosis (Vircell, España), comparado con dos métodos comerciales usados frecuentemente en este laboratorio, para el diagnóstico de la Hidatidosis: HIDATEST (Laboratorio Lemos, Argentina) y ELISA IgG Echinococcus (Vircell, España). El análisis se realizó sobre 224 muestras de igual número de pacientes; 48 (21,4%) pertenecían a pacientes con quistes probablemente hidatídicos, mientras que 10 (4,5%) a pacientes con quistes no parasitarios. Se agregaron a ellos, 166 (74,1%) muestras que resultaron previamente negativas en la casuística de este laboratorio. Para los tres métodos antes mencionados, la concordancia entre los resultados obtenidos fue evaluada por el estadístico Kappa, donde en todos los casos pudo apreciarse un grado de acuerdo casi excelente. La sensibilidad y especificidad de VIRAPID fueron de 94,1%, 98,9%, ELISA 90,6%, 99,4% e HIDATEST 96,0%, 96,2%, respectivamente. Los TDRs para hidatidosis pueden ser útiles en aquellos entornos con escasos recursos para establecer la certeza diagnóstica. La prueba VIRAPID® Hidatidosis demostró tener un muy buen rendimiento, aunque sería interesante evaluar la sensibilidad del test en presencia de quistes inactivos, lo cual, se supone podría plantear problemas para el diagnóstico.

The presumptive diagnosis of cystic echinococcosis (EQ) is based on clinical and imaging studies, particularly those that apply Ultrasound, in epidemiological data, and is confirmed with specific serology. In rural endemic areas, where imaging procedures are not always available, as with conventional serology due to the lack of sufficiently equipped laboratories, rapid diagnostic tests (TDRs) can be a very useful tool. The diagnostic accuracy of VIRAPID® Hydatidosis (Vircell, Spain) was evaluated here, compared with two commercial methods frequently used in the Laboratory, for the diagnosis of Hydatidosis: HIDATEST (Laboratorio Lemos, Argentina) and ELISA IgG Echinococcus (Vircell, Spain). The analysis was performed on 224 samples from the same number of patients; 48 (21.44%) belonged to patients with probable hydatid cysts, while 10 (4.46%) belonged to patients with non-parasitic cysts. A total of 166 (74.10%) samples that were previously negative in the casuistry of our Laboratory were added. For the three methods mentioned above, the agreement between the results obtained was evaluated by the Kappa statistics, where in all the cases an almost excellent degree of agreement could be appreciated. The Sensitivity and Specificity of VIRAPID® was 94.12%, 98.88%, ELISA 90.57%, 99.44% and HIDATEST 96.00%, 96.17%, respectively. TDRs for hydatidosis may be useful in settings with limited resources to establish diagnostic certainty. The VIRAPID® test showed a very good performance, although it would be interesting to evaluate the sensitivity of the test in the presence of inactive cysts, which can pose problems for the diagnosis.

O diagnóstico presuntivo de equinococose cística (EQ) baseia em estudos clínicos e de imagem, em particular aqueles que aplicam ultrasom, em dados epidemiológicos, e é confirmado com a sorologia específica. Em áreas endêmicas rurais, onde os procedimentos de imagens nem sempre estão disponíveis, como acontece com a sorologia convencional devido à falta de laboratórios suficientemente equipamentados, os testes de diagnóstico rápido (TDRs) podem ser uma ferramenta de grande utilidade. A precisão do diagnóstico de VIRapid® hidatidose (Vircell, Espanha) foi avaliada aqui, em comparação com dois métodos comerciais frequentemente usados neste laboratório, para o diagnóstico de Hidatidose: HIDATEST (Laboratório Lemos, Argentina) e ELISA IgG Echinococcus (Vircell, Espanha). A análise foi realizada em 224 amostras do mesmo número de pacientes; 48 (21,4%) pertenciam a pacientes com cistos provavelmente hidatídicos, enquanto 10 (4,5%) pertenciam a pacientes com cistos não parasitários. Adicionaram-se a eles 166 (74,1%) amostras que resultaram previamente negativas na casuística desse Laboratório. Para os três métodos citados acima, a concordância entre os resultados obtidos foi avaliada pela estatística Kappa, onde em todos os casos um grau de concordância quase excelente pôde ser apreciado. Sensibilidade e especificidade de VIRapid® foi de 94,1%, 98,9%, ELISA 90,6%, 99,4% e HIDATEST, 96,0% e 92,6%, respectivamente. Os TDRs para hidatidose podem ser úteis em ambientes com recursos limitados para estabelecer a certeza diagnóstica. O teste VIRAPID® Hidatidose mostrou ter desempenho muito bom, apesar de que seria interessante avaliar a sensibilidade do teste em presença de cistos inativos, o que se supõe pode causar problemas para o diagnóstico.

Prevalencia de las parasitosis intestinales en el Hospital de Enfermedades Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz" / Prevalence of intestinal parasites in Infectious Diseases Hospital "Dr. Francisco Javier Muñiz" / Prevalência de parasitoses intestinais no Hospital de Doenças Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz"

Se evaluaron en forma retrospectiva los resultados obtenidos del procesamiento de muestras fecales y escobillados anales, remitidos para su estudio al laboratorio de la Sección Parasitología del Hospital de Enfermedades Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz" de la Ciudad de Buenos Aires, durante el período comprendido entre enero y diciembre de 2016. Se tuvieron en cuenta los resultados de 1253 estudios parasitológicos de materia fecal y de 268 escobillados anales, correspondientes a 1207 pacientes. No fueron considerados los resultados de las muestras de 432 pacientes, de los cuales no se poseía alguno de los datos evaluados. Las muestras fecales resultaron positivas en 288 (22,98%) casos, mientras que en 33 (12,31%) escobillados anales, fueron positivas para la presencia de huevos de Enterobius vermicularis. La presencia de Blastocystis sp. fue detectada en 194 (17,1%) pacientes, seguida en orden de frecuencia por Entamoeba coli (51; 4,5%), Giardia lamblia (47; 4,1%) y Endolimax nana (32; 2,8%). El hallazgo de coccidios arrojó una prevalencia de 1,2% (n=14) para Cryptosporidium sp. y de 1,3% (n=15) para Cystoisospora belli. Cuando se evaluó la incidencia de parasitosis de acuerdo con la edad de los pacientes, se observó la existencia de significancia de diferencias entre proporciones de pacientes parasitados con edades menores o iguales a 15 años y mayores a esta edad. Por otro lado, no se encontró significancia de diferencias entre las proporciones de mujeres y varones con estudios coproparasitológicos positivos. El presente estudio, realizado con una metodología simple, al alcance de laboratorios de baja complejidad, ha puesto en evidencia que el número de géneros y especies encontrados en las muestras analizadas presenta heterogeneidad espacial, con los valores más altos representados por Blastocystis sp., seguido por protozoarios intestinales (Giardia lamblia y amebas no patógenas), así como una prevalencia importante de coccidios en las muestras fecales de la población estudiada, asociada a pacientes con SIDA. Estudios posteriores y más completos, que incluyan una mayor cantidad de datos de los pacientes evaluados, posibilitarán un mejor conocimiento de las coproparasitosis presentes en la población asistida en el Hospital Muñiz.

The results obtained during the period between January and December 2016 of the fecal samples and anal sclerosis, were submitted retrospectively to the laboratory of the Parasitology Section of the Hospital of Infectious Diseases "Francisco Javier Muñiz" of the City of Buenos Aires. The results of 1253 parasitological studies of fecal matter and of 268 gauzes anal swabbing, corresponding to 1207 patients, were taken into account. The results of the samples from 432 patients were left out, and none of their data was evaluated. Fecal samples were positive in 288 (22.98%) cases, while 33 (12.31%) were positive for the presence of Enterobius vermicularis eggs. The presence of Blastocystis sp. was detected in 194 (17.1%) patients, followed in order of frequency by Entamoeba coli (51. 4.5%), Giardia lamblia (47. 4.1%) and Endolimax nana (32. 2.8%). The finding of coccidiosis showed a prevalence of 1.2% (n = 14) for Cryptosporidium sp. and 1.3% (n = 15) for Cystoisospora belli. When the incidence of parasitosis was evaluated according to the age of the patients, the existence of significant differences between proportions of parasitized patients with ages less than or equal to 15 years and older was observed. On the other hand, no significant differences were found between the proportions of women and men with positive coproparasitological studies. The present study, performed with a simple methodology, within the reach of low complexity laboratories, has shown that the number of genera and species found in the analyzed samples presents spatial heterogeneity, with the highest values represented by Blastocystis sp., followed by Giardia lamblia and non-pathogenic amoebae, as well as an important prevalence of coccidia in fecal samples of the population studied, associated with AIDS patients. Further and more complete studies, including a greater amount of data of the evaluated patients, will facilitate a better knowledge of the coproparasitosis present in the assisted population in the Muñiz Hospital.

Foram avaliados os resultados em forma retrospectiva para o processamento de amostras fecais e swabs anais, enviados para sua consideração ao laboratório da Seção de Parasitologia do Hospital de Doenças Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz" da cidade de Buenos Aires. Foram considerados os resultados de 1253 estudos parasitológico das fezes e 268 de swab anal, correspondentes a 1207 pacientes. Não foram considerados os resultados de amostras de 432 pacientes, dos quais não existía algum dos dados avaliados. As amostras fecais resultaram positivas em 288 (22,98%) casos, enquanto que em 33 (12,31%) swabs anais foram positivas para a presença de ovos de Enterobius vermicularis. A presença de Blastocystis sp. foi detectada em 194 (17,1%) pacientes, seguida em ordem de frequência por Entamoeba coli (51, 4,5%), Giardia lamblia (47, 4,1%) e Endolimax nana (32, 2,8%). O achado de coccídios mostrou uma prevalência de 1,2% (n = 14) para o Cryptosporidium sp. e de 1,3% (n = 15) para Cystoisospora belli. Quando a incidência de parasitoses de acordo com a idade dos pacientes foi avaliada, observou-se a existência de significância de diferenças entre as proporções de pacientes parasitados com idade menor ou igual a 15 anos e com mais de15 anos. Por outro lado, não houve significância de diferenças entre as proporções de mulheres e homens com estudos coproparasitológicos positivos. Este estudo, realizado com uma metodologia simples disponível para laboratórios de baixa complexidade, mostrou que o número de gêneros e espécies encontradas nas amostras analisadas apresenta heterogeneidade espacial, com os mais altos valores representados por Blastocystis sp., seguido por protozoários intestinais (Giardia lamblia e amebas não patogênicas), bem como uma prevalência significativa de coccídios nas amostras fecais da população do estudo, associada com doentes de AIDs. Estudos posteriores e mais abrangentes, incluindo maior número de dados dos pacientes avaliados, permitirá uma melhor compreensão das coproparasitoses presentes na população atendida no Hospital Muñiz.

Adult female of Strongyloides stercoralis in respiratory secretions

<p><b>OBJECTIVE</b>To communicate the presence of adult females, rabditoid larvae and eggs of Strongyloides stercoralis (S. stercoralis) in the respiratory secretions obtained by tracheal aspirate from a HIV-negative patient who was suffering from polymyositis, and treated with corticoids and amethopterin and assisted by pneumonia.</p><p><b>METHODS</b>The respiratory secretions submitted to the Parasitology Laboratory of the Muñiz Hospital were made more concentrated by centrifugation (1 500 r/min for 15 seconds). Wet mount microscopy was performed with the pellet.</p><p><b>RESULTS</b>It revealed adult females, rabditoid larvae and eggs of S. stercoralis. Further parasitological studies performed after the start of the treatment with ivermectin on fresh fecal samples, gastric lavages and tracheal aspirates showed scanty mobile filariform and rabditoid larvae of the same parasite.</p><p><b>CONCLUSIONS</b>The presence of adult female S. stercoralis which has never been observed before in the clinical samples submitted to our Laboratory for investigation can be considered as an indirect marker of the severe immunosupression of the patient.</p>

Diagnóstico presuntivo de histoplasmosis en un frotis sanguíneo / Presumptive diagnosis of histoplasmosis in a blood smear / Diagnóstico presuntivo de histoplasmose em um esfregaço de sangue

Se comunica el diagnóstico de un caso de histoplasmosis asociada al SIDA a partir de la microscopía de un extendido hemático realizado en oportunidad del procesamiento de una muestra enviada al laboratorio para un estudio hematológico. El extendido, fijado con metanol y teñido con solución de Giemsa al 10% reveló, con objetivo de 100X, estructuras levaduriformes de 2-4 µ de diámetro dentro de las células leucocitarias sanguíneas, con la típica tinción en casquete y la presencia de un halo claro periférico, que caracterizan microscópicamente a Histoplasma capsulatum. Luego, para confirmar el hallazgo micológico, se procedió a teñir el mismo preparado con la técnica de Grocott, la cual puso de manifiesto levaduras de color pardo, dentro de los leucocitos sanguíneos. El paciente, deteriorado clínica e inmunológicamente (<50 linfocitos T CD4+/µL), falleció al día siguiente de efectuado el diagnóstico, a pesar de las medidas terapéuticas tomadas. Este hallazgo pone de manifiesto la necesidad de contar, en un Centro de Referencia de Enfermedades Infecciosas, con operadores entrenados para reconocer estructuras microbianas de importancia diagnóstica en extendidos hemáticos, aún en el Laboratorio General. El diagnóstico inmediato de ésta y otras infecciones graves, como el paludismo, a partir de estas muestras permite instalar un tratamiento etiológico y mejorar las posibilidades de éxito terapéutico.

A case of AIDS-associated histoplasmosis diagnosed by microscopy from a blood smear performed during a hematologic study was reported. The smear, fixed with methanol and stained with 10% Giemsa solution, revealed with a 100X objective, 2-4 µ-diameter yeast - like structures within the leuMicrobiología contakocytes, showing a typical staining in cap and a peripheral clear halo, characteristic of Histoplasma capsulatum. To confirm the mycological finding, the same smear was stained with the Grocott technique, showing brownish yeasts in the leucocytes. The patient, clinically deteriorated and with advanced immunological disorder (<50 T CD4+ lymphocytes/µL), died the next day after the diagnosis was made, in spite of the established treatments. This finding highlights the need to have operators trained in the recognition of microbiological structures of diagnostic importance in hematological smears in a Reference Center of Infectious Diseases, and even in the General Laboratory. The immediate diagnosis of this and other serious infections, as Malaria, enables the etiologic treatment and increases the possibilities of therapeutic success.

Comunica-se o diagnóstico de um caso de histoplasmose associada à AIDS, de uma microscopia de extensão sanguínea realizada por ocasião do processamento de uma amostra enviada ao laboratório para um estudo hematológico. A extensão, fixada com metanol e corada com solução de Giemsa a 10%, revelou com objetivo de 100X, estruturas leveduriformes de 2-4 µ diâmetro dentro de células leucocitárias do sangue, com a típica coloração em tampão e a presença de um halo claro periférico, os quais caracterizam microscopicamente a Histoplasma capsulatum. Em seguida, para confirmar o achado micológico, foi corada a mesma preparação com a técnica de Grocott, que mostrou leveduras de cor parda, dentro dos leucócitos sanguíneos. O paciente clínica e imunologicamente deteriorado (<50 células T CD4+/ µL) morreu um dia após o diagnóstico, apesar das medidas terapêuticas adotadas. Este achado evidencia a necessidade de contar, em um Centro de Referência para Doenças Infecciosas, com operadores treinados para reconhecer estruturas microbianas de importância diagnóstica em extensões sanguíneas, mesmo no Laboratório Geral. O diagnóstico imediato desta e de outras infecções graves como a Malária, a partir de uma extensão sanguínea torna possível instalar um tratamento etiológico e melhorar as chances de êxito terapêutico.

Estrongiloidosis diseminada en un paciente con SIDA / Disseminated strongyloidiasis in an AIDS patient / Estrongiloidíase disseminada em um paciente com AIDS

Se comunica un caso de hiperinfección por Strongyloides stercoralis diagnosticado a partir de una secreción respiratoria obtenida por lavado broncoalveolar (LBA). El paciente, oriundo de una región endémica (Paraguay), VIH positivo (50 linfocitos T CD4+/µL en sangre venosa periférica) se internó por un cuadro pulmonar, presuntivamente identificado como neumocistosis pulmonar (PCP). La microscopia en fresco del concentrado de las secreciones respiratorias reveló larvas rabditoides y filariformes de Strongyloides stercoralis. En la microscopia con tinta china del LCR se observaron levaduras capsuladas (por cultivo Criptococcus neoformans) y la determinación del antígeno polisacárido capsular de C. neoformans fue de 1/1000 en sangre y 1/10 en LCR. El estudio virológico por PCR del LCR fue positivo para citomegalovirus, mientras que el estudio parasitológico del mismo fue negativo, al igual que el examen micológico de las secreciones respiratorias. Tras el diagnóstico parasitológico comenzó el tratamiento con ivermectina (200 µg/kg/día vía oral), el cual resultó ineficaz, tal como lo determinó la presencia de larvas móviles en la microscopia de una muestra de aspirado traqueal. El paciente falleció 3 días después.

A case of Strongyloides stercoralis hyperinfection diagnosed from respiratory secretions obtained by bronchoalveolar lavage (BAL) is communicated. The patient, born in an endemic region (Paraguay), HIV positive (50 T CD4+ lymphocytes/µL), was hospitalized with respiratory pathology, presumptively suspected as pulmonary pneumocystosis (PCP). Fresh microscopy of the respiratory secretions concentrate revealed filariform and rabditoide larvae of Strongyloides stercoralis. India ink microscopy of CSF showed capsulated yeasts (Criptococcus neoformans by culture). The titles bron of polysaccharide capsular antigen of C. neoformans were 1/1.000 in blood and 1/10 in CSF. Virological study of CSF by PCR was positive for citomegalovirus, and parasitological examination was negative, as well as the mycological study of respiratory secretions. After diagnosis, treatment with ivermectin (200 µg/kg/day) was started, which proved ineffective, as was determined by the presence of multiple motile larvae in the microscopy of a tracheal lavage. The patient died 3 days later.

Comunica-se um caso de hiperinfecção por Strongyloides stercoralis diagnosticado a partir de uma secreção respiratória obtida através de lavagem broncoalveolar (LBA). O paciente, originário de uma região endêmica (Paraguai), HIV positivo (50 linfócitos T CD4+/µL em sangue venoso periférico) foi hospitalizado devido a um quadro pulmonar, presuntivamente identificado como pneumocistose pulmonar (PCP). A microscopia em fresco da concentração das secreções respiratórias revelou larvas rabditoides e filariformes de Strongyloides stercoralis. Na microscopia com tinta nanquim do LCR foram observadas leveduras capsuladas (por cultura Criptococcus neoformans) e a determinação do antígeno polissacarídeo capsular de C. neoformans foi de 1/1000 em sangue e 1/10 em LCR. O estudo virológico por PCR do LCR foi positivo para Citomegalovirus, enquanto que o estudo parasitológico do mesmo foi negativo, do mesmo modo que o exame micológico das secreções respiratórias. Após o diagnóstico parasitológico começou o tratamento com ivermectina (200 µg/kg/día vo), o qual resultou ineficaz, tal como foi determinado pela presença de larvas móveis na microscopia de uma amostra de aspiração traqueal. O paciente faleceu 3 dias depois.

Evaluación de la microscopía en fresco en el diagnóstico de neumocistosis pulmonar / Microscopio examination in fresh mount preparation for the diagnosis of pulmonary pneumocystosis / Avaliagáo da microscopia a fresco no diagnóstico de pneumocistose pulmonar

Para evaluar la utilidad de la microscopia en fresco en el diagnóstico de la neumocistosis pulmonar (PCP), se aplicó una técnica de inmunofluorescencia directa (IFD) con anticuerpos monoclonales a 50 secreciones respiratorias obtenidas por lavado broncoalveolar y procesadas en forma consecutiva en el Laboratorio de Parasitología, entre el 19 de enero y el 25 de febrero de 2011. Las mismas pertenecían a pacientes con SIDA y diagnóstico presuntivo de PCP, y en todas ellas la investigación de la presencia de exudados espumosos por microscopia en fresco fue negativa. Ninguna de las muestras procesadas resultó positiva para Pneumocystis jiroveci con la IFD. En base a los resultados obtenidos se concluyó que la microscopia en fresco permanece como un método rápido, económico, sencillo y seguro para el diagnóstico de la PCP en los pacientes con SIDA internados en diferentes Salas del Hospital Muñiz. Al igual que en un estudio previo, reveló poseer una sensibilidad similar a la IFD en los pacientes evaluados.

To evaluate the usefulness of fresh microscopy for the diagnosis of pulmonary pneumocystosis (PCP), direct immunofluorescence (DIF) with monoclonal antibodies technique was applied to 50 respiratory secretions obtained by bronchoalveolar lavage and consecutively processed in the Laboratory of Parasitology from January 19, 2011 to February 25, 2011. The samples belonged to AIDS patients with presumptive diagnosis of PCP, and all of them were negative for the search of foamy exudates by wet mountmicroscopy. No positive results were obtained for Pneumocystis jiroveci with the DIF. According to the results obtained, it was concluded that fresh microscopy remains being a rapid, economic, simple and accurate method for the diagnosis of PCP in AIDS patients assisted in different Wards of the Muñiz Hospital. As in a previous study, performed in a similar cohort of patients, fresh microscopy revealed a sensitivity similar to that of DIF when applied to the diagnosis of PCP.

Para avaliar a utilidade da microscopia a fresco no diagnóstico da pneumocistose pulmonar (PCP), foi aplicada uma técnica de imunofluorescencia direta (IFD) com anticorpos monoclonais em 50 secregóes respiratórias obtidas por lavagem broncoalveolar e processadas de forma consecutiva no Laboratório de Parasitologia, entre os dias 19 de janeiro de 2011 e 25 de fevereiro de 2011. As mesmas pertenciam a pacientes com AIDS e diagnóstico presuntivo de PCP, e em todas elas a pesquisa da presenga de esfregagos espumosos por microscopia a fresco foi negativa. Nenhuma das amostras processadas resultou positiva para Pneumocystis jiroveci com a IFD. Com base nos resultados obtidos foi concluido que a microscopia a fresco permanece como um método rápido, económico, simples e seguro para o diagnóstico da PCP nos pacientes com AIDS internados em diferentes. Salas do Hospital Muñiz. Do mesmo modo que num estudo prévio, revelou possuir uma sensibilidade similar a IFD nos pacientes avaliados.

El diagnóstico de la leishmaniasis cutánea: a propósito de un caso / Diagnosis of cutaneous leishmaniasis: a case report

Se describe el caso de un paciente con leishmaniasis cutáneo-mucosa proveniente de Israel, quien viajó por regiones endémicas de esta enfermedad en América Latina durante el último año. Consultó por la presencia de lesiones úlcero-costrosas, levemente dolorosas, de 45 días de evolución, una en la región del mentón (acompañada de inflamación local y adenopatía regional submentoniana), de aproximadamente 2 cm de diámetro, y otra, más pequeña, en el borde lateral del ojo derecho. Con material tomado por escarificación de los bordes de las lesiones, se realizaron extendidos que fueron fijados y coloreados con la técnica de Giemsa. La microscopia reveló la presencia de amastigotes de Leishmania. Conocida la etiología, se inició tratamiento específico con antimonio de meglumina (Glucantime®), a razón de 20 mg/kg/día, durante 21 días, con buena tolerancia y cicatrización de las lesiones. Las lesiones de leishmaniasis cutáneo-mucosa deben incluirse en el diagnóstico diferencial de las úlceras tropicales y su diagnóstico etiológico requiere de un procedimiento sencillo, al alcance de laboratorios de baja complejidad.

An Israeli patient with cutaneous leishmaniasis who had been travelling in Latin America during the previous year was described. The patient presented with two lesions, one crusty ulcer in the chin region which was slightly painful and with regional adenopathy, and a smaller ulcer in the lateral edge of the right eye. The diagnosis was established by microscopic observation of Leishmania sp. in skin scrapings stained with Giemsa. Systemic treatment with meglumine antimony (Glucantime ®), 20 mg / kg / day during 21 days was administered without adverse events and ulcer reepithelialization. Cutaneous leishmaniasis should be included in the differential diagnosis of tropical ulcers, and etiologic diagnosis requires a simple procedure, available to low-complexity laboratories.

Candiduria nosocomial: etiología y prevalencia de sus agentes causales en el Hospital Paroissien / Nosocomial candiduria: Etiology and prevalence of its causal agents in Paroissien Hospital

Se evaluó retrospectivamente la etiología y evolución de la frecuencia de los agentes causales de candiduria, en 300 episodios ocurridos en pacientes internados en el Hospital Paroissien, entre el 21 de enero de 2000 y el 30 de diciembre de 2009. Fueron diagnosticados 33 (11,0%) episodios en 2000, 26 (8,7%) en 2001, 34 (11,3%) en 2002, 20 (6,7%) en 2003, 30 (10,0%) en 2004, 25 (8,3%) en 2005, 47 (15,7%) en 2006, 27 (9,0%) en 2007, 33 (11,0%) en 2008 y 25 (8,3%) en 2009. Candida tropicalis, C. albicans, C. glabrata y C. parapsilosis prevalecieron en orden descendente de frecuencia y C. guillermondii, C. krusei y C. lusitaniae se aislaron excepcionalmente. C. tropicalis prevaleció entre 2000-2002, 2004-2006 y en 2008, seguida por C. albicans, que fue la más prevalente en 2003, 2007 y 2009. C. glabrata ocupó el segundo lugar en 2000, 2004 y 2006 y el tercero en los demás años, salvo en 2001, 2008 y 2009, cuando fue desplazada por C. parapsilosis, que en 2009 ocupó el primer lugar junto con C. albicans. Los resultados obtenidos confirman el predominio de las especies de Candida no- albicans como agentes causales de candiduria en la población estudiada, particularmente C. tropicalis, desde 2003, que podría mantenerse actualmente. La ausencia de datos previos impidió discernir si los patrones hallados son recientes o se mantuvieron a través del tiempo.

The present study carried out a retrospective evaluation of the etiology and evolution of the frequency of the causal agents of 300 candiduria events diagnosed in patients assisted at the Paroissien Hospital from 2 January 2000 to 30 December 2009. A total of 33 (11.0%) episodes were dioagnosed in 2000, 26 (8.7%) in 2001, 34 (11.3%) in 2002, 20 (6.7%) in 2003, 30 (10.0%) in 2004, 25 (8.3%) in 2005, 47 (15.7%) in 2006, 27 (9.0%) in 2007, 33 (11.0%) in 2008 and 25 ( 8.3%) in 2009. C. tropicalis, C. albicans, C. glabrata y C. parapsilosis were, in descendent order, the most frequent species involved, with C. guillermondii, C. krusei and C. lusitaniae only exceptionally isolated. C. tropicalis was the most prevalent between 2000-2002, 2004-2006 and in 2008, followed by C. albicans, which was the most prevalent in 2003, 2007 and 2009. C. glabrata was the second species in 2000, 2004 y 2006 and the third in the remaining years studied, except for 2001, 2008 and 2009 when it was displaced by C. Parapsilosis, which held the first place in 2009, along with C. albicans. The results obtained confirm the predominance of the Candida no - albicans species as etiological agents of candiduria in the popularion under study, particularly C. tropicalis, from 2003 onwards, possibly until nowadays. However, due to the lack of previous studies on the subject, it was impossible to determine if the patterns observed are only recent or if they have remained unaltered for longer periods of time.

Diagnóstico de criptococosis a partir de lesiones cutáneas / Diagnosis of cryptococcosis in cutaneous lesions

Se realizó el diagnóstico de criptococosis en un paciente con lesiones cutáneas de aspecto moluscoide, presentes en gran número en el rostro, sospechadas clínicamente de ser provocadas por Histoplasma capsulatum. El paciente, posteriormente diagnosticado como VIH positivo, presentó además Cryptococcus neoformans en el LCR y fue tratado con anfotericina B endovenosa. Con material obtenido por escarificación de las lesiones se realizaron extendidos y practicaron cultivos. Aplicadas a los extendidos, las coloraciones de Giemsa, Grocott y mucicarmín de Mayer, permitieron la observación de levaduras redondas y capsuladas que en los cultivos en agar semillas de girasol desarrollaron colonias de color pardo que correspondieron a Cryptococcus neoformans.

Diagnosis of cryptococcosis was performed in a patient with multiple cutaneous Muluscum contagiosumlike lesions in the face, clinically suspected as produced by Histoplasma capsulatum. The patient, after being diagnosed HIV positive, also showed Cryptococcus neoformans in the CSF, and was treated with intravenous amphotericin B. Clinical samples from the skin lesions were obtained and smears stained by Giemsa, Grocott and Mayer's mucicarmin were performed. Part of these samples, obtained by scrapping the ulcers, were suspended in isotonic saline solution and cultivated in Sabouraud dextrose agar and sunfloweragar; Cryptococcus neoformans colonies were identified.

Desarrollo de Cryptococcus neoformans en medios de cultivo empleados para diagnóstico bacteriológico / Growth of Cryptococcus neoformans in culture media for bacteriologic diagnosis

Se evaluó la capacidad de desarrollo de una cepa de Cryptococcus neoformans en cinco medios de cultivo (sin antibióticos antibacterianos) empleados habitualmente para el diagnóstico bacteriológico: agar sangre de carnero (ASC), chocolate, cisteína lactosa deficiente en electrolitos (CLDE), eosina-azul de metileno y Salmonella-Shigella (SS). Una suspensión de la cepa Cn 003, de la colección de la Cátedra de Micología, fue sembrada en la superficie de estos medios contenidos en placas de Petri que se incubaron a 28 ºC y 37 ºC, durante una semana. Excepto en el SS, C. neoformans desarrolló colonias evidenciables a simple vista en los medios evaluados. En ASC y agar chocolate, a 37 ºC desarrollaron colonias mucoides mientras que a 28 ºC, éstas fueron pastosas o cremosas. En todos los medios y a las temperaturas de incubación empleadas, el tamaño de las colonias fue menor que el alcanzado en el medio de Sabouraud, empleado como control. La falta de reconocimiento de las colonias de Cryptococcus neoformans cuando desarrollan en los medios habitualmente empleados en el diagnóstico bacteriológico puede provocar la falta de diagnóstico de la criptococosis, cuando ésta no es sospechada o bien cuando las colonias desarrollan a partir de muestras no habituales.

The ability of C. neoformans to grow in five culture media usually employed in bacteriologic diagnosis (blood agar, chocolate agar, CLDE, eosin-metilen blue and Salmonella-Shigella agars) was evaluated. A Cn 003 strain suspension, obtained from our collection was sown in these media contained in Petri dishes and incubated at 28 ºC and 37 ºC during one week. Except in SS agar, C. neoformans developed visually observed colonies. In ASC and chocolate agar, mucous colonies developed at 37 ºC, whereas at 28 ºC, they were pasty and creamy. The size of the colonies was, in all the bacteriological media and temperatures employed, smaller than that observed on Sabouraud agar, used as control. No recognition of the Cryptococcus neoformans colonies developed in culture media usually employed for the bacteriologic diagnosis can cause a lack of cryptococcosis' diagnosis, when this disease is not suspected or develops from unusual samples.